本发明公开了快速检测细菌性中枢神经系统感染病原的引物和探针，包括针对12种病原体的特异性引物和探针，如SEQIDNO.1～36所示。本发明还公开了快速检测细菌性中枢神经系统感染病原的核酸检测试剂盒，包括上述针对12种病原体的特异性引物和探针。本发明通过12种细菌病原体各自的基因组进行生物信息学分析，筛选出了各自的保守基因序列，设计了针对12种病原体的引物探针，然后通过双标记两两组合，最终实现6管PCR反应同时上机检测12种细菌病原体，并且12种细菌病原体的最低检测限均不低于10copie/μl，大大降低了工作量，节约了原材料的同时还提高了检测效率，为早期中枢神经系统感染筛查提供了良好的指导用药。