本发明公开了检测染色体非整倍体的扩增组合物，包括：针对1号染色体的内参基因上下游引物；针对13‑三体、18‑三体、21‑三体、X染色体、Y染色体的目标基因上下游引物；6种Taqman探针，如SEQ ID NO.1～18所示。还公开了检测染色体非整倍体的检测试剂盒，包括上述检测染色体非整倍体的扩增组合物，以及用于进行数字PCR的反应体系。还公开了检测染色体非整倍体的方法。采用本发明的方法检测羊水中胎儿染色体非整倍体，大大缩短了实验周期，对于无创产前筛查中的阳性或假阳性样本都可以进行快速的验证，减少了患者家属焦急等待的时间，而且准确性提高，不存在检测失败的情况，在一定程度上降低了成本。