一种化学‑酶法制备熊去氧胆酸的方法，包括将猪去氧胆酸加入到第一有机溶剂中，并在氧化剂作用下氧化得到6‑氧代‑石胆酸得到6‑氧代‑石胆酸；将所述6‑氧代‑石胆酸和磺酰肼衍生物加入到第二有机溶剂中，使所述6‑氧代‑石胆酸和所述磺酰肼衍生物发生亲核加成‑消去反应，得到腙类化合物；在惰性气体环境下，采用还原剂将所述腙类化合物还原得到石胆酸；将所述石胆酸在羟化酶和辅酶的催化作用下进行羟基化反应，得到熊去氧胆酸。该方法以猪去氧胆酸为初始原料，经过三步化学法和一步生物酶法得到熊去氧胆酸，整个合成工艺步骤少，操作简单，产率高，成本低，可以广泛适用于工业化规模生产。