本发明公开了一种丙氨酸脱氢酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过蛋白质工程改造嗜热古细菌(Archaeoglobusfulgidus)来源丙氨酸脱氢酶，使其最适酶活温度由82℃降至50℃，在大肠杆菌K12中删除L‑丙氨酸合成竞争路径上的关键基因，减少副产物生产，重组菌株中的编码L‑丙氨酸脱氢酶alaD基因和丙氨酸消旋酶dadX基因替换为改造后的嗜热古细菌来源的丙氨酸脱氢酶基因，利用该重组菌株进行在发酵罐中进行两阶段发酵，发酵42h，L‑丙氨酸产量达到153.9g/L，糖酸转化率81.0％。