本发明公开了有机磷降解酶纳米磁珠抗体复合物、ELISA检测试剂盒及其应用。本发明首先提供了一种有机磷降解酶纳米磁珠抗体复合物，其制备方法包括：制备有机磷降解酶纳米磁珠；将有机磷降解酶纳米磁珠进行氨基化修饰，得到氨基化的有机磷降解酶纳米磁珠；用有机磷通用抗体包被氨基化有机磷降解酶纳米磁珠即得。本发明进一步公开了由所述有机磷降解酶纳米磁珠抗体复合物制备得到的ELISA检测试剂盒，本发明进一步公开了应用该ELISA检测试剂盒检测有机磷农药残留的方法，对多种有机磷农药具有显著的识别作用，检测方法的灵敏度显著提高。