本发明涉及一种基于重组汉逊酵母细胞技术高效培养、表达乙肝表面抗原的方法，属于医药生物工程技术领域。本发明所述方法包括一级种子培养步骤、二级种子培养步骤、三级种子培养步骤、发酵培养步骤。本发明中重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)细胞扩增、培养表达后的细胞密度比现有基因重组乙肝疫苗细胞扩增、培养表达的细胞密度更高，HBsAg表达量更高，且HBsAg颗粒结构完整，细胞颗粒大小均一。