本发明提供一种目标物含量检测方法，包括将样本S1与酶循环试剂接触，经预设时间T1得到中间样本S2；然后向中间样本S2中加入发光试剂得到发光的中间样本S3，并测定中间样本S3的发光信号强度；再基于预先建立的所述发光信号强度与第一底物浓度的关联模型，确定样本S1中的第一底物浓度。此外，本发明还提供一种检测试剂在目标物含量检测方法中的应用。本发明通过合理的设计，将酶循环法和化学发光法巧妙地联合，既放大了检测信号浓度，又能借助化学发光法灵敏响应H2O2信号，使检测灵敏度提高到埃摩尔水平，极大地提高了临床体外诊断检测的精准率，解决了目前市场上缺乏有效地实现埃摩尔水平样本生化和化学发光检测方法的现状。