本发明属于生物技术领域，公开了一种亚临界低温萃取鳄鱼油的工艺，具体过程包括将鳄鱼脂肪进行洗净、脱水、切碎，将鳄鱼脂肪置于一萃取室内多次萃取获得萃取初油，再将萃取初油置于再萃取室内获得再萃取油，最终获得鳄鱼油。通过本工艺萃取获得鳄鱼油，在浸泡过程中，不饱和脂肪酸和微量元素进行自由扩散，提高了不饱和脂肪酸和微量元素脱离远机体细胞进入萃取剂的容易度；先获取萃取初油，再获取再萃取油，提高了萃取的纯度，减少了萃取产物的杂质。同时，本工艺保持了鳄鱼脂肪经过萃取过后剩余的粕的质量，且未破坏其中部分物质活性，方便其再次开发利用。因此，本发明应用前景广泛，适合推广使用。