本发明公开了属于生物工程技术领域的一种Vip3Aa20兔多克隆抗体的制备方法，所述多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：a)通过原核表达得到Vip3Aa20重组蛋白；b)免疫动物：将Vip3Aa20重组蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔；c)效价检测；d)多克隆抗体纯化及western验证。所述多克隆抗体为实现抗虫蛋白Vip3Aa20在转基因玉米MIR162中的定性、定量检测奠定基础。