本发明公开了一种产软骨素的重组谷氨酸棒杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先在谷氨酸棒杆菌异源表达UDP‑N‑乙酰葡萄糖胺C4异构酶编码基因kfoA和软骨素合成酶编码基因kfoC，以及过表达glmU、galU和ugd以及glmS和glmM，初步构建了软骨素的合成途径；随后通过对软骨素合成酶(KfoC)进行随机突变，发现KfoC(H357GN363S)突变体可以将软骨素产量提高200％。利用蛋白质融合技术将kfoA,kfoC(突变体)和ugd基因(编码UDP‑葡萄糖脱氢酶)融合，使表达的UDP‑N‑乙酰葡萄糖胺C4异构酶，软骨素合成酶和UDP‑葡萄糖脱氢酶形成人工复合体，将软骨素的产量进一步提高。