本发明公开了一种基于树脂吸附法分离乳酸链球菌素的方法，用于分离的填料树脂球的粒径为20‑60um，所述的填料树脂中分布着互相连通的孔径为50‑200nm的网孔。本发明通过降低大孔吸附树脂法中用于填料的树脂球粒径的尺寸，极大的提高了分离的分辨率，从而获得纯度更高的乳酸链球菌。同时提高了树脂球中离子交换树脂网格中的孔径的尺寸，孔径尺寸的增大一方面大于待分离的乳酸链球菌尺寸，另一方面便于分离的液体中的其它物质从孔径中通过，大大降低了分离过程的系统压力，最低可到1bar，使得大规模工业化生产变为可能。