本发明提供了一种检测人结核分支杆菌的电容式生物芯片的制备方法，从NCBI下载结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌和非洲结核分枝杆菌的全基因序列，选择能特异性识别MTBC的IS6110基因作为靶基因一，选择能区别牛型和人型结核分枝杆菌的ORFRD11基因作为靶基因二；基于靶基因，选出六段碱基片段作为DNA探针1、2、3、4、5、6，并将各DNA探针基因固化到可变电容式微纳米生物检测芯片的极板一上，即得；其中，各DNA探针均为3’端修饰巯基后的碱基片段。本发明还提供了一种上述检测人结核分支杆菌的电容式生物芯片的使用方法。本发明芯片的检测范围广、检测时间短，且检测精密度较高，便于临床检验的开展。