本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种检测生物素含量、叶酸含量和维生素B12含量的方法，包括步骤一、提取样品的清液；步骤二、稀释标准品和样品清液；步骤三、培养稀释后的标准品和样品清液；步骤四、制定标准品的标准曲线和检测样品；该方法能同时提取生物素、叶酸和维生素B12，从而提高了生物素、叶酸和维生素B12的检测效率，具有易于操作和检测灵敏度高的优点。