本发明涉及一种突变改造Prx6蛋白及其表达基因、制备方法和应用，属于生物工程技术领域。该突变改造Prx6蛋白通过定点突变技术对人Prx6蛋白进行以下至少一个位点的突变改造得到：第39位氨基酸由His突变成Asn，第50位氨基酸由Glu突变为His，第78位氨基酸由Asp突变为由Arg，第103位氨基酸由Asp突变为Lys，第132位氨基酸由Arg突变为Gln。该突变改造Prx6蛋白的抗氧化活性提高，能够高效的清除自由基，保护细胞免受氧化损伤，适合作为抗氧化及抗衰老药物进行研发和生产。并且该突变改造Prx6蛋白产量高、性质稳定，由此解决了同类型天然抗氧化酶(如GPx、Grx)活性不稳定及来源不足等问题，在生物制药方面具有广阔前景。