本发明公开了一种大肠杆菌dnaQ基因校正功能丧失的基因增变菌株及制备方法与应用。该增变菌株通过编码大肠杆菌DNA聚合酶IIIε亚基的基因dnaQ被敲除、插入失活或突变而丧失其DNA复制过程中校正功能而获得的。本发明通过利用λ‑Red重组酶方法，对编码大肠杆菌DNA聚合酶IIIε亚基具的基因dnaQ进行敲除，获得了DNA复制过程中校正功能丧失的增变菌株，该菌株的突变能力为野生型的25000倍，是高效的基因诱变手段。同时减少筛选优良性状的工作时间成本，提高科研工作和工程菌选育的效率。