本发明涉及生物工程及病毒疫苗技术领域，具体涉及一种基于MultiBac杆状病毒表达系统的禽流感疫苗及制备与应用。本发明选择H7N9和/或H5N1亚型禽流感病毒流行毒株的HA基因作为靶抗原，使用MultiBac杆状病毒表达系统快速高效表达H7N9和H5N1亚型禽流感病毒的HA蛋白，进一步制备得到禽流感疫苗，该疫苗克服了现有流感灭活疫苗在生产及灭活过程中存在散毒风险的问题，提供了一种防控H7N9和H5N1禽流感病毒流行传播的候选疫苗。