本实用新型属于生物工程技术领域，尤其为一种封闭式差压无菌生物接种装置，包括罐体，所述罐体的顶部固定安装有电动机，所述电动机的输出轴上固定套设有主动齿轮，所述罐体上分别转动安装有第一搅拌杆和第二搅拌杆，所述第一搅拌杆上分别固定套设有从动齿轮和第一皮带轮，且从动齿轮与主动齿轮相啮合，所述第二搅拌杆上固定套设有第二皮带轮，且第一皮带轮与第二皮带轮之间缠绕有同一个皮带，所述罐体上设有灭菌装置，所述第一搅拌杆与第二搅拌杆上固定安装有多个搅拌叶片。本实用新型实用性强，可以降低接种针管被污染的概率，还可以增加微生物菌群与培养液的混合速度，从而提高微生物菌群的繁殖速度和繁殖效率。