本发明涉及一种粪肠球菌噬菌体及其分离、纯化、富集和应用，属于生物工程领域。该噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为:CCTCCNO:M2019276，保藏日期为2019年4月19日，该噬菌体对粪肠球菌有强的裂解作用。在本发明中，该噬菌体从电镜形态上分析，属于典型的有尾噬菌体，肌尾科噬菌体，将其命名为粪肠球菌噬菌体PEf771；噬菌体PEf771感染温度范围在20～42℃；噬菌体PEf771在pH4～8均有70％以上活性，噬菌体PEf771热稳定性不佳，不能耐受60℃以上长时间高温。采用本发明的噬菌体能特异性裂解粪肠球菌。在应用实例也证实，该噬菌体可用于由粪肠球菌引起的细菌感染，作为抗生素的替代品，安全有效的维护口腔微生态。