本发明公开了一种发酵合成α‑红没药醇的工程菌株及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌为宿主，以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌与酿酒酵母的三穿梭质粒pEBS为表达载体，在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌引入将不同来源的BBS基因和不同来源的ispA基因进行不同组合的优化表达，再进行密码子优化、RBS优化、启动子优化等策略，实现了高效生物合成α‑红没药醇。本发明为微生物系统高效发酵制备(﹣)‑α‑红没药醇奠定了基础，适合于工业化生产应用。