本发明公开了一种高效全细胞催化制备熊去氧胆酸的方法，包括以下步骤：步骤一、在7α‑羟基类固醇脱氢酶和氧化型辅酶NAD+或NADP+存在的条件下将溶于水溶液中的底物结合态鹅去氧胆酸的7位α‑羟基氧化成羰基，形成中间产物结合态7‑羰基‑石胆酸；步骤二、在步骤一反应后的混合物中，向混合物中加入7β‑羟基类固醇脱氢酶和还原型辅酶NADH或NADPH，将中间产物7位羰基还原成β‑羟基得到结合态熊去氧胆酸；该发明反应底物浓度高达100g/L，转化率大于99.5％，熊去氧胆酸收率95％以上，产品质量符合国际标准，工艺先进，环境友好。