本发明属于疫苗抗原技术领域，公开了一种采用非免鸡蛋制备鸡传染性支气管炎病毒抗原的方法，包括以下步骤：采用鸡传染性支气管炎非免鸡蛋，控制前孵化条件进行前孵化；鸡传染性支气管炎病毒毒株接种于鸡胚，接种剂量为105.0EID50/枚；接种后控制后孵化条件进行后孵化，接种后24h照检，弃去死胚，接种后36h后将鸡胚放入2~8℃冷藏室，冷藏12h后收获病毒尿囊液；对收获的病毒尿囊液检验毒价，浓缩，纯化得到鸡传染性支气管炎病毒抗原。该方法用非免鸡蛋替换SPF鸡蛋，同时确定了鸡传染性支气管炎病毒在非免鸡蛋中繁殖的工艺条件，既保证了疫苗质量，又降低了疫苗研究及生产成本，可为疫苗生产企业提供巨大的参考价值，应用前景广阔。