本发明涉及乳酸菌的技术领域，具体来说，是一种提高冻干存活率和保护乳酸菌生物活性的两次八层包埋技术，具体为一种乳酸菌冻干粉的两次八层包埋方法。在乳酸菌发酵终点处，在发酵液中加入灭过菌的壳聚糖，搅拌均匀，然后进行离心，得到离心后的菌泥，在离心后的菌泥中加入按菌泥重量计的15.0％‑35.0％冻干保护剂进行冻干，将普鲁兰多糖雾化，对菌粉进行喷干。发明降低冻干过程中菌数死亡率，提高冻干后菌粉活性、提高收得率、降低常温放置的死亡率、提高乳酸菌粉耐胃酸、胆盐的能力。