本发明属于基因工程和微生物工程改造技术领域，提供了一种高产青霉素酰化酶的毕赤酵母突变菌株及其应用。所述突变菌株是通过紫外诱变筛选获得的，保藏编号为CCTCCNO：M2019924。所述菌株可广泛应用于青霉素酰化酶的生产，从而有利于降低青霉素酰化酶的生产成本，促进其在β‑内酰胺类抗生素工业合成中的推广与应用。